規格96 Tグルカゴン様ペプチド2（GLP-2）ヒトキット

規格96 Tグルカゴン様ペプチド2（GLP-2）ヒトキット
概要
グルカゴン様ペプチド2（GLP−2）は33アミノ酸のペプチドである。GLP-2は胃腸蠕動、胃酸分泌、腸管ヘキソ糖輸送を調節し、腸管上皮細胞の障壁機能を増加させる。それは巣細胞の増殖を刺激し、腸細胞と巣の細胞アポトーシスを抑制することによって、粘膜上皮の表面積を明らかに増強した。小腸と大腸炎症の場合、GLP-2は死亡率を下げ、粘膜損傷を減らすことができる。その作用は、胃、小腸、結腸の腸内分泌細胞に発現されるGタンパク質カップリング受容体であるGLP−2受容体によって形質転換される。本キットヒトGLP−2免疫測定は、細胞培養上清、血清及び血漿中のヒトGLP−2を測定するための3段階法固相サンドイッチELISAである。キットは、大腸菌発現組換えヒトGLP−2と組換えタンパク質に対する抗体とを含む。天然ヒトGLP−2を用いて得られた結果は、組換え規格品を用いて得られた標準曲線と平行な線形曲線を示した。これらの結果は、このキットが天然ヒトGLP−2の相対質量値を測定するために使用できることを示している。

けんしゅつげんり

キットは二重抗体サンドイッチ法を用いたELISA技術：捕捉抗体を酵素標識板に被覆し、サンプル及び標準品中の測定物GLP-2を捕捉し、インキュベーション洗浄後、標識された測定抗体を加えてインキュベーション後洗浄し、「捕捉抗体-抗原-検出抗体」免疫複合体を形成し、その後、ストレプトマイシンと素カップリングされたワサビペルオキシダーゼを加えてインキュベーションし、インキュベーション終了後洗浄し、続いてTMB発色液を添加した後、サンプル中に測定物があれば青色に見える場合、終了液を加えて反応を停止する。測定中に遊離した成分はすべて洗浄され、酵素スケールで450 nmでOD値を測定し、色の濃淡とサンプル中の測定対象物の含有量は比例し、標準曲線を描くことによってサンプル中のGLP-2の濃度を算出した。

操作の要点

1.タンパク質溶液を混合する場合は、常に泡立ちを避けなければならない。交差汚染を避けるために、標準品、サンプル、試薬を添加する際にピペット銃のヘッドを交換しなければならない。また、各試薬は容器を単独で使用しなければならない。

2.試薬が断続的にプレート孔に添加されていることを確認します。正確な結果を確保するためには、インキュベーション工程において封止フィルムを接着する必要がある。

3.自動洗濯機を使用する場合、洗濯緩衝液を添加した後、30秒の浸漬期間を添加するか、洗濯工程の間にプレートを180度回転させることで、測定精度を高めることができる。

4.発色剤はプレートに添加するまで無色のままであること。発色剤が光を受けないことを確認します。発色剤は無色から青色に変化しなければならない。

5.発色剤と同じ順序でプレートに終止液を添加しなければならない。終止液を加えると、穴に形成された色が青から黄色に変わります。緑色の細孔は、終止液がマトリックス溶液と十分に混合されていないことを示している。

必要なその他の材料

1.450 nm測定波長を含む酵素スケール、600-680 nm補正波長を含むことがより好ましい、

2.ピペット及びガンヘッド、

3.蒸留水又は脱イオン水、

4.100-1000 mLメスシリンダー、

5.ボトル洗浄、ガン排出又は自動微孔板洗浄機、

6.500±50 rpmの速度を保持できる水平軌道微孔板発振器、

7.標準品とサンプルを希釈するための試験管。

仕様96 Tグルカゴン様ペプチド2（GLP-2）ヒトキット
注意事項

1.本キットが提供する終止液は希硫酸溶液であり、一定の腐食性があり、慎重に操作すべきである。

2.本キットの一部の成分は防腐剤を含んでおり、皮膚アレルギー反応を引き起こす可能性があり、マスクを着用して霧を吸い込まないようにしなければならない。

3.発色剤Bは皮膚、目、気道刺激を引き起こす可能性があり、マスクを着用して霧を吸い込まないようにしなければならない。

4.防護手袋、目と顔の防護用品を着用し、処理後に手を洗う。

試薬準備

1.使用前にすべての試薬を室温で30分程度平衡させた。

2.洗浄液／希釈液の配置：洗浄液／希釈液（20×）に結晶析出がある場合、37℃で加熱して結晶全体を溶解する必要がある。蒸留水1：20で希釈する（例：1 mL濃縮洗浄液を19 mLの蒸留水に加える）

標準品の配置

キットから標準品を取り出し、準備する7つの試験管、まず200ナノグラム/ミリリットル標準品（200μL）必要に応じて一定量を吸引して1×希釈液で10 ng/mLに希釈し（例：50μLの標準品母液＋950μLの1×希釈液、1000μLの10 ng/mL濃度標準品を調製する）、その後6つの試験管にそれぞれ500μLの1×希釈液を添加し、この6つの個別の試験管の中で10 ng/mL標準品を順に2倍比で6つの勾配に希釈し、7つの濃度の標準品を調製し、順に：10%の/ml、5%の/ml、2.5%の/ml、1.25 ng/ml、0.625 ng/ml、0.313 ng/ml、濃度標準品溶液からの吸引500μL標準品を次の試験管に入れ、軽く吹き付けて混合し、このようにして標準品の倍比希釈を行い（図に示すように）、1×希釈液をゼロ濃度標準品（0 ng/mL）として使用する

結果の計算

標準品とサンプルの復孔の平均を計算するOD値を減算し、ブランク穴のOD値を補正値として減算します。濃度を横座標、OD値を縦座標とし、座標紙に4パラメータ論理関数の標準曲線（作図時に空白グループの値を除く）を描画するか、4パラメータ論理（4-P）曲線フィッティングを生成できるコンピュータソフトウェアを使用して標準曲線を作成します。サンプルOD値が標準曲線の上限より高い場合は、適切に希釈して再測定し、サンプル濃度を計算する際に対応する希釈倍数を乗算しなければならない。

サンプルデータ

以下のデータと曲線は参考だけであり、実験者は自分の実験データに基づいて標準曲線を構築する必要がある。

本図に示す標準曲線は例に供するものであり、結果計算は同次試験標準品によって描かれた標準曲線を基準としてサンプル結果を計算すべきである
感度

サンプルテストにより、本キットの検出感度は0.08ng/mL

特異性

このキットアッセイは、天然および組換えヒトを識別することができるGLP-2。

希釈緩衝液中の他の関連タンパク質の調製方法50ng/mL，そして交差反応性を測定した。明らかな交差反応は観察されなかった。

実験手順のまとめ
1.標準品及びサンプルを加え、37℃で1.5時間遮光反応し、3回洗浄した。

2. 抗体を追加し、37℃で1 hの遮光反応を行い、4回洗浄した。

3. 酵素付加結合物、37℃で30分間遮光反応し、4回洗浄した。

4.発色液を加え、37℃で15分間遮光反応させた。

5.終止液を加え、5分以内に数字を読む

人グルカゴン様ペプチド2（GLP-2）キットは、細胞培養上清、血清、血漿中のヒトのGLP-2、本製品を使用する前に、本明細書を完全に読む必要がありますあ、人ELISAキットは科学研究用のみであり、他の診断には使用できない。