全国郵送システ天プロテアーゼ7（CASP 7）ヒトキット

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モデル

製造者の性質: プロデューサー

製品カテゴリー

原産地

オンラインコンサルト

概要

CASP 7遺伝子によってコードされるタンパク質である全国のカプセル化システ天プロテアーゼ7（CASP 7）ヒトキット。CASP 7の相同性は、完全なゲノムデータを持つほとんどの哺乳動物で発見されている。caspase（アスパラギンプロテアーゼ）ファミリーのメンバーであり、細胞アポトーシスの実行タンパク質であることが証明されています。

製品詳細

全国送料込みシステムプロテアーゼ7（CASP 7）ヒトキット
概要
システ天プロテアーゼ7（CASP 7）は、CASP 7遺伝子によってコードされるタンパク質である。CASP 7の相同性は、完全なゲノムデータを持つほとんどの哺乳動物で発見されている。caspase（アスパラギンプロテアーゼ）ファミリーのメンバーであり、細胞アポトーシスの実行タンパク質であることが証明されています。逐次活性化されたCaspaseは、アポトーシスの実行段階で中核的な役割を果たしている。Caspasesは不活性なプロトターゼとして存在し、上流のcaspase（caspase-8、-9）の保存されたアスパラギン残基上の蛋白分解処理を経て、2つのサブユニット、大きいものと小さいものを生成し、二量体は異種四量体形態の活性酵素を形成する。このcaspaseの前駆体はcaspase 3、caspase 10、およびcaspase 9によって切断される。本キットヒトCASP 7免疫測定は、細胞培養上清、血清及び血漿中のヒトCASP 7を測定するための3段階法固相サンドイッチELISAである。キットは、大腸菌発現組換えヒトCASP 7と、組換えタンパク質に対する抗体とを含む。天然ヒトCASP 7を用いて得られた結果は、組換え規格品を用いて得られた標準曲線と平行な線形曲線を示した。これらの結果は、このキットが天然人CASP 7の相対質量値を測定するために使用できることを示している。

けんしゅつげんり

キットは二重抗体サンドイッチ法を用いたELISA技術：捕捉抗体を酵素標識板に被覆し、サンプル及び標準品中の測定物CASP 7を捕捉し、インキュベーション洗浄後、標識された測定抗体を加えてインキュベーションした後、洗浄し、「捕捉抗体−抗原−検出抗体」免疫複合体を形成し、その後、ストレプトマイシンと素カップリングされたワサビペルオキシダーゼを加えてインキュベーションし、インキュベーション終了後に洗浄し、続いてTMB発色液を添加した後、サンプル中に測定物があれば青色に見える場合、終了液を加えて反応を停止する。測定中に遊離した成分はすべて洗浄され、酵素スケールで450 nmでOD値を測定し、色の濃淡とサンプル中の測定対象物の含有量は比例し、標準曲線を描くことによってサンプル中のCASP 7の濃度を算出した。

操作の要点

1.タンパク質溶液を混合する場合は、常に泡立ちを避けなければならない。交差汚染を避けるために、標準品、サンプル、試薬を添加する際にピペット銃のヘッドを交換しなければならない。また、各試薬は容器を単独で使用しなければならない。

2.試薬が断続的にプレート孔に添加されていることを確認します。正確な結果を確保するためには、インキュベーション工程において封止フィルムを接着する必要がある。

3.自動洗濯機を使用する場合、洗濯緩衝液を添加した後、30秒の浸漬期間を添加するか、洗濯工程の間にプレートを180度回転させることで、測定精度を高めることができる。

4.発色剤はプレートに添加するまで無色のままであること。発色剤が光を受けないことを確認します。発色剤は無色から青色に変化しなければならない。

5.発色剤と同じ順序でプレートに終止液を添加しなければならない。終止液を加えると、穴に形成された色が青から黄色に変わります。緑色の細孔は、終止液がマトリックス溶液と十分に混合されていないことを示している。

必要なその他の材料

1.450 nm測定波長を含む酵素スケール、600-680 nm補正波長を含むことがより好ましい、

2.ピペット及びガンヘッド、

3.蒸留水又は脱イオン水、

4.100-1000 mLメスシリンダー、

5.ボトル洗浄、ガン排出又は自動微孔板洗浄機、

6.500±50 rpmの速度を保持できる水平軌道微孔板発振器、

7.標準品とサンプルを希釈するための試験管。

全国送料込みシスターゼ7（CASP 7）ヒトキット
注意事項

1.本キットが提供する終止液は希硫酸溶液であり、一定の腐食性があり、慎重に操作すべきである。

2.本キットの一部の成分は防腐剤を含んでおり、皮膚アレルギー反応を引き起こす可能性があり、マスクを着用して霧を吸い込まないようにしなければならない。

3.発色剤Bは皮膚、目、気道刺激を引き起こす可能性があり、マスクを着用して霧を吸い込まないようにしなければならない。

4.防護手袋、目と顔の防護用品を着用し、処理後に手を洗う。

試薬準備

1.使用前にすべての試薬を室温で30分程度平衡させた。

2.洗浄液／希釈液の配置：洗浄液／希釈液（20×）に結晶析出がある場合、37℃で加熱して結晶全体を溶解する必要がある。蒸留水1：20で希釈する（例：1 mL濃縮洗浄液を19 mLの蒸留水に加える）

標準品の配置

キットから標準品を取り出し、準備する7つの試験管、まず400ng/mL標準品（200μL）必要に応じて一定量を吸引して1×希釈液で20 ng/mLに希釈し（例：50μLの標準品母液＋950μLの1×希釈液、1000μLの20 ng/mL濃度標準品を調製する）、その後6つの試験管にそれぞれ500μLの1×希釈液を添加し、この6つの個別の試験管の中で20 ng/mL標準品を順に2倍比で6つの勾配に希釈し、7つの濃度の標準品を調製し、順に：20%/ml、10%/ml、5%/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml，濃度標準品溶液からの吸引500μL標準品を次の試験管に入れ、軽く吹き付けて混合し、このようにして標準品の倍比希釈を行い（図に示すように）、1×希釈液をゼロ濃度標準品（0 ng/mL）として使用する

全国包邮胱天蛋白酶7(CASP7)人试剂盒

結果の計算

標準品とサンプルの復孔の平均を計算するOD値を減算し、ブランク穴のOD値を補正値として減算します。濃度を横座標、OD値を縦座標とし、座標紙に4パラメータ論理関数の標準曲線（作図時に空白グループの値を除く）を描画するか、4パラメータ論理（4-P）曲線フィッティングを生成できるコンピュータソフトウェアを使用して標準曲線を作成します。サンプルOD値が標準曲線の上限より高い場合は、適切に希釈して再測定し、サンプル濃度を計算する際に対応する希釈倍数を乗算しなければならない。

サンプルデータ

以下のデータと曲線は参考だけであり、実験者は自分の実験データに基づいて標準曲線を構築する必要がある。