5637人膀胱癌細胞

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細胞株：

1、細胞系（Cell Line）：初代培養ダンスの継代成功は細胞系になり、初代培養物中に元々存在していた細胞系（Lineage of Cells）から構成される。

2、細胞株（Cell Strain）：選択法またはクローン形成法により初代培養物または細胞株から特殊な性質または標識を有するものを細胞株と呼ぶ。細胞株の特殊な性質またはマーカーは、培養期間全体にわたって常に存在しなければならない。継代や継代数に限りがある場合は、有限細胞株（finitecell strain）と呼ばれ、連続継代が可能な場合は、連続細胞株（continuous cell strain）と呼ばれます。ヒト腫瘍細胞に対して、体外で半年以上培養し、成長が安定し、連続的に継代されたものを連続性株または系と呼ぶことができる。

（一）初代育成

初代培養は原代培養とも呼ばれ、体内から直接取り出した細胞、組織、器官による初めての培養物である。いったん継代培養（Subculture）された細胞は、初代培養とは呼ばず細胞系と改称される。

（二）細胞系

初代培養物が最初の継代培養を開始した後の細胞、すなわち細胞系と呼ばれる。細胞系の生存期間が限られている場合は、有限細胞系（Finite Cell Line）と呼ばれ、無限増殖能力を獲得して持続的に生存できる細胞系（連続細胞系または無限細胞系（Infinite Cell Line））。無限細胞系の多くはすでに異倍化が発生し、異倍体核型を備えており、悪性細胞になっている可能性があるため、本質的にはすでに転化が発生している細胞系である。無限細胞系には永生性（または不死性）しかないが、接触抑制と異体接種による発癌性は維持されている、あるものは永生性があるだけでなく、異体接種も腫瘍性があり、悪性化していることを示している。この2つの異なる性質の無限細胞系は、国内外の文献においてもこれらの名詞への応用は非常に厳格ではないことが多い。概念上の明確さのために、本書では悪性のある無限細胞系に採用されている！°悪性形質転換細胞系！±という言葉のほうが適切かもしれない。永生性で悪性のない細胞系には、無限細胞系または形質転換細胞系を使用すればよい。現在伝えられているNIH 3 T 3、Rat-1、10 T 1/2などはすべてこのような細胞系に属している。

細胞培養操作：

1）蘇生細胞：細胞懸濁液1 mLを含む凍結保存管を37℃水浴中で急速に揺動解凍し、培地4 mLを加えて均一に混合した。1000 rpm条件下で3分間遠心分離し、上澄み液を捨て、培地を1〜2 mL加えた後、均質に吹き付けた。その後、すべての細胞懸濁液を適量の培地を含むフラスコに加えて一晩培養する（または細胞懸濁液を6 cm皿に加え、約4 mLの培地を加え、一晩培養する）。翌日に液を交換し、細胞密度を検査した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。 a、培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

b、1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53 mM EDTA）を培養瓶に加え、消化液をすべての細胞に浸潤させ、消化液を捨て、培養瓶を37℃培養箱に入れて1-3 min消化し（細胞消化の状況に応じて）、その後顕微鏡下で細胞消化の状況を観察し、細胞の大部分が丸くなって脱落すると、速やかに操作台に戻し、培養瓶を軽くたたいた後、2-3 ml培地を加えて消化を停止した。軽く均等にしてから無菌遠心管に入れ、1000 rpmで5 min遠心し、上澄み液を捨て、培養液1-2 mLを補充してから均等に吹き付ける。 。

c、細胞懸濁液を新しい8 mL培地を含む新しい皿または瓶に1：2の割合で分け、培養箱に入れて培養した。

3）細胞凍結保存：細胞成長状態が良好な場合、細胞凍結保存を行うことができる。次のT 25本を例に挙げます。

a、細胞を収集し、無菌遠心管に入れ、1000 rpm条件下で4分間遠心し、上澄み液を捨て、PBSで一回洗浄し、PBSを捨て、細胞計数を行った。

b、細胞数に応じて無血清細胞凍結保存液を加え、細胞密度5×106 ~ 1×107/mLを軽く混合し、凍結保存管ごとに1 mLの細胞懸濁液を凍結保存し、凍結保存管に注意して標識をしっかりと行う。

c、凍結貯蔵管を−80℃の冷蔵庫に入れ、24時間後に液体窒素灌漑貯蔵に移した。次回取り出すために、チューブの凍結位置を記録します。

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