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豚嚢尾蚴プローブ法による蛍光定量PCRキットの使用方法
日付:2025-11-07読む:1

豚嚢尾蚴プローブ法による蛍光定量PCRキットの使用方法:

測定法の感度は報告された酵素に由来する。酵素は有機触媒であり、少量の酵素で大量の触媒反応を誘導し、観察可能な発色反応現象を発生させることができる。そのため、この系はしばしば酵素増幅系と呼ばれている。

1.標準品の希釈:本キットは原倍標準品1本を提供し、ユーザーは以下の図表に従って小試験管の中で希釈することができる。24μg/ml 5号標準品150μlの原倍標準品に150μl標準品希釈液を添加

12μg/ml 4号標準品150μlの5号標準品に150μl標準品希釈液を添加

6μg/ml 3号標準品150μlの4号標準品に150μl標準品希釈液を添加

3μg/ml 2号標準品150μlの3号標準品に150μl標準品希釈液を添加

1.5μg/ml 1号標準品150μlの2号標準品に150μl標準品希釈液を添加

2.サンプリング:それぞれ空白穴、標準穴、測定対象サンプル穴を設ける。酵素標識被覆プレートに標準品を正確に50μl添加し、測定試料孔に試料希釈液40μlを添加した後、測定試料10μlを添加した(試料の最終希釈度は5倍)。サンプリングしてサンプルを酵素スケールプレートの穴の底に加え、できるだけ穴の壁に触れないようにして、軽く揺れて混ぜます。|

3.温育:封板膜で封板した後、37℃で30分間温育した。

4.配液:30倍濃縮洗浄液を蒸留水で30倍希釈して予備用

5.洗浄:封板膜を慎重にはがし、液体を捨て、乾燥させ、穴ごとに洗浄液を満タンにし、30秒静置した後に廃棄し、このように5回繰り返し、乾燥させた。

6.酵素添加:酵素標的試薬を穴ごとに50μl添加し、空白穴を除く。

7.温育:操作は同3。

8.洗浄:操作は同5。

9.発色:穴ごとに発色剤A 50μlを添加し、発色剤B 50μlを添加し、軽く振動混合し、37℃で光を避けて15分間発色した。

10.終了:1ウェル当たり終止液50μlを添加し、反応を終了する(この時、青色は黄色に立転する)。

11.測定:ブランクエアコンゼロ、450 nm波長順に各孔の吸光度(OD値)を測定する。測定は終止液添加後15分以内に行う。


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