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ADIPOR 2ブタリポビン受容体2酵素結合免疫キットの操作手順:
1.標準品の希釈と添加:酵素標準包被板に標準品孔10孔を設け、di一、第二孔にそれぞれ標準品100μlを添加し、その後di一、第二孔に標準品希釈液50μlを添加し、混合する、その後、di一孔、第二孔からそれぞれ100μlを取って第三孔と第四孔に加え、更に第三、第四孔にそれぞれ標準品希釈液50μlを加えて、混合する、その後、第3孔と第4孔にそれぞれ50μlずつ取って捨て、さらにそれぞれ50μlを取ってそれぞれ50μlを取ってそれぞれ第7、第8孔に加え、さらに第7、第8孔にそれぞれ標準品希釈液50μlを加え、混和した後、第7、第8孔から第5、第6孔に加え、さらに第5、第6孔にそれぞれ標準品希釈液50 ulを加え、混和する。混和した後、第5、第6の孔からそれぞれ50μlを取って第9、第10の孔に加え、更に第9の第10の孔にそれぞれ標準品希釈液50μlを加え、混和した後、第9の第10の孔からそれぞれ50μlを取って捨てた。(希釈後の各孔添加量はいずれも50μl、濃度はそれぞれ180 ng/L、120 ng/L、60 ng/L、30 ng/、15 ng/L)。
2.試料添加:それぞれ空洞(空洞対照孔に試料及び酵素標識試薬を添加せず、残りの各工程の操作は同じ)、測定対象試料孔を設置する。酵素標準被覆プレート上の測定試料ウェルに試料希釈液40μlを添加した後、測定試料10μlを添加した(試料の最終希釈度は5倍)。サンプリングしてサンプルを酵素スケールプレートの穴の底に加え、できるだけ穴の壁に触れないようにして、軽く揺れて混ぜます。
3.温育:封板膜で封板した後、37℃で30分間温育した。
4.配液:30(48 Tの20倍)倍濃縮洗浄液を蒸留水30(48 Tの20倍)倍希釈して予備用する。
5.洗浄:封板膜を慎重にはがし、液体を捨て、乾燥させ、穴ごとに洗浄液を満タンにし、30秒静置した後に廃棄し、このように5回繰り返し、乾燥させた。
6.酵素添加:酵素標的試薬を穴ごとに50μl添加し、空白穴を除く。
7.温育:操作は同3。
8.洗浄:操作は同5。
9.発色:穴ごとに発色剤A 50μlを添加し、発色剤B 50μlを添加し、軽く振動混合し、37℃で光を避けて15分間発色した。
10.終了:1ウェル当たり終止液50μlを添加し、反応を終了する(この時、青色は黄色に立転する)。
11.測定:ブランクエアコンゼロ、450 nm波長順に各孔の吸光度(OD値)を測定する。測定は終止液を加えた後15分でなければならない。