豚肺炎マイコプラズマ（MP）ELISA検出キット

本キットは科学研究にのみ使用でき、医学診断には使用できません

豚（豚の）肺炎マイコプラズマ（国会議員）MELISA検出キット

取扱説明書

けんしゅつげんり

キットは二重抗体一段階サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）前もって包む被肺炎マイコプラズマ（国会議員）抗体の被覆微小孔には、標本、標準品、HRP標識の検出抗体をインキュベートし、洗浄した。基質TMBを用いて発色し、TMBはペルオキシダーゼの触媒下で青色に変換し、酸の作用下で最終的な黄色に変換する。色の濃淡とサンプル中の肺炎マイコプラズマ（国会議員）提示正相関。酵素スケールで450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、サンプル濃度を計算した。

サンプル収集、処理及び保存方法

1.血清：熱源と内毒素を含まない試験管を使用し、操作中にいかなる細胞刺激を回避し、血液を収集した後、3000回転遠心10分で血清と赤血球を迅速に注意深く分離した。

2.血漿：EDTA、クエン酸塩またはヘパリン抗凝固。3000回転遠心30分で上清を取る。

3.細胞上清：3000回転遠心10分間で粒子とポリマーを除去する。

4.組織均質：組織を適量の生理食塩水に加えて砕く。3000回転遠心10分で上清を取る。

5.保存：サンプル収集後に適時に検査しない場合は、一回の使用量で分注して、-20℃に凍結保存して、繰り返しの凍結融解を避けて、室温で解凍して、サンプルが均一に凍結を充分解することを確保してください。

持参品

1. 酵素スケール（450ナノメートル）

2. 高精度サンプラ及びガンヘッド：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温タンク

操作上の考慮事項

1. キット保存先2〜8℃、前室温平衡を用いて20分間。冷蔵庫から取り出した濃縮洗浄液は結晶化するのが正常で、水浴加熱により結晶化したquanが溶解してから使用する。

2. 実験中に使われなかったスラットはすぐに自己封袋に戻し、密封（低温乾燥）して保存しなければならない。

3. 濃度は0のS 0号標準品は陰性対照または空白と見なす、説明書に従って操作する時にサンプルはすでに5倍希釈して、最終結果は5を掛けてサンプルの実際の濃度です。

4. 説明書に記載された時間、液添加量及び手順に従って温育操作を厳格に行う。

5. すべての液体成分を使用する前に十分に均一に振る。

キット組成

注：標準品（S 0-S 5）濃度順番に次のようになります。0、1.25、2.5、5、10、20ナノグラム/mL

試薬の準備

20×洗浄緩衝液の希釈：蒸留水を1：20で希釈する、すなわち1部の20×洗浄緩衝液に19部の蒸留水を加える。

プレート洗浄方法

1. 手動洗濯板：穴内の液体を振り切り、穴ごとに洗浄液を満タンにし、静置する1 min後に穴の中の液体を振り切って、吸水紙の上でたたいて乾かして、このように板を5回洗います。

2. 自動洗濯機：穴ごとに洗浄液を注入する350μL，1 min浸し、プレートを5回洗います。

豚肺炎マイコプラズマ（MP）ELISA検出キット操作手順

1. 室温平衡から20 min後のアルミニウム箔袋から必要なスラットを取り出し、残りのスラットをセルフシール袋で密封して4℃に戻した。

2. 標準品穴とサンプル穴の設置、標準品孔にそれぞれ異なる濃度の標準品を添加する50μL

3. サンプル穴の追加測定対象サンプル10μL，さらにサンプル希釈液40μLブランクホールを追加しない

4. ブランクホールを除く、標準品孔とサンプル孔にそれぞれの孔にワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識された検出抗体100μL、反応孔を封板膜で封止し、37℃水浴釜または恒温箱で60 minインキュベートした。

5. 液体を捨て、吸水紙をたたいて乾かし、穴ごとに洗浄液を満タンにし、静置する1min，洗濯液を振り切って、吸水紙をたたいて乾かし、このように洗濯板を5回繰り返します（洗濯機で洗濯板を洗うこともできます）。

6. 穴ごとに基質を入れるA、B各50μL、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

7. 穴ごとに終止液を入れる50μL、15 min内で、450 nm波長で各ウェルのOD値を測定した。

結果の判断

標準カーブの描画ひょうじゅんかーぶのびょうが:Excelワークシートでは、標準品濃度を横座標とし、OD値に対応して縦座標とし、標準品線形回帰曲線を描き、曲線方程式に基づいて各サンプル濃度値を計算する。

豚肺炎マイコプラズマ（MP）ELISA検出キットキット性能

1. 正確性：標準品の線形回帰と予想濃度相関係数R値、0.9900以上。

2. 感度：最もdi検出濃度がより小さい0.1ナノグラム/ミリリットル。

3. 特異性：他の可溶性構造類似体と交差反応しない。

4. 繰り返し性：板内、板間変異係数はすべて以下である15%。

5. 保管：2〜8℃、遮光防湿保存。

6. 有効期間：6ヶ月

免責事項

1. キットは研究用のみであり、臨床実験やネズミ匹体実験をして、さもなくば発生したすべての結果は、実験者が負担して、当社は一切責任を負いません。

2. 厳格に説明書に従って操作し、実験者は説明書の操作に違反し、結果は実験者が負担する。