一、無着色シート

染色終了後、スライスには陽性信号は見られなかった。これは通常の仕事でよく見られる現象で、この現象は2つの可能性があります。

1、真陰性結果：染色過程全体に問題はなく、組織または細胞は確かに抗体に関連する抗原を発現しない。

2、偽陰性結果：すなわちこの陰性結果は真実の反映ではない。偽陰性結果はまた、（1）スライス中に所望の検査を受けた組織または細胞が全く含まれていない場合の2つに分けることができる。このような場合、スライス、抗体またはワックスブロックの選択を誤ってしまう。正しいスライスを得て染色することは、正しい結果を得るための前提である。（2）染色中のある部分またはある部分に問題が発生した。例えば、組織は抗原修復を行わず、ある組織は抗原修復を経なければ抗原発現を検出できない、あるいは、パラフィン包埋組織ではなく凍結組織にしか使用できない抗体を選択した、あるいは抗失効、抗体失効は理論的には徐々に過ぎていくが、たまに突然失効することもあり、抗体が長期にわたって使用されないことや有効期限を超えていることが主な原因である。染色過程で二抗や三抗を加えるのを忘れたり、二抗を2回使って三抗を欠いたり、DABを調製する際に過酸化水素が少なくなったりするなど、ある一環が漏れていることも見られる。このような簡単な間違いを回避するためには、3つのインキュベーションが終了したときに、スライス上の3つの抗を1枚の白紙に振り、調製されたDABを白紙の3つの抗に滴下し、茶色が出ているかどうかを観察する簡単な方法がある。もし発生したら、三抵抗とDABの調製過程に間違いがないことを証明する。このようなDABがスライスに滴下しても陽性信号が出ない場合、問題は3抗の前にあるに違いない。紙に茶色の反応が出なければ、問題は三抗またはDABの調製過程にあるに違いない。この簡単な方法は、問題が発生する可能性のある原因を見つけるのに迅速に役立ちます。

二、「雑音」染色シート

免疫グループは通常の真の陽性信号を除いて通常の背景着色に遭遇することが多く、これらの非正常な着色は「雑音」染色。「雑音」染色は種類が多く、発生する原因も多種多様であるため、説明の便宜上、以下にいくつかにまとめる。

1、全面着色

全錠着色とは、スライス全体が色に染まっていることを意味し、着色の強度は深くても浅くてもよく、つまり、それらの組織が陽性である組織が陰性であるかどうかを区別できない。この現象の原因は次のとおりです。

（1）抗体濃度が高すぎる：一抗濃度が高すぎることはよく見られる原因の一つである。解決策は、新しい抗体を使用するたびにその作業濃度をテストし、各抗体を個体化し、自分の実験室に適した理想的な作業濃度を見つけるべきであり、即使用型の抗体でもそうであるべきであり、簡単に説明書通りに染色することはできない。

（2）抗体培養時間が長すぎるか、温度が高い：解決方法は、操作規程を厳格に実行し、時計や時計を身につけて、忘れによる時間の延長を避けるようにタイムリーに注意することが望ましい。現在流行している二段階法（Polymer）は感受性が高く、一度のインキュベーションに抵抗する時間は従来の1時間ではなく30分であることが求められているため、染色結果に基づいて調整する必要がある。

（3）DABの変質と発色時間が長すぎる：DABは現配合を使用したほうがよく、沈殿物があれば濾過してから使用するべきである。調製されたDABは保存時間が長すぎるべきではありません。酵素がない場合、過酸化水素も酸素原子を遊離してDABと反応してDABの効力を低下させるので、使い終わっていないDABは冷蔵庫に保管してから数日後にこのような節約のような方法を使うのは望ましくありません。DABの発色は顕微鏡下で監視することが好ましく、理想的な染色程度に達するとすぐに反応を停止する。しかし、染色シートが多すぎる場合や染色機を使用する場合は、現実的ではないようですが、少なくともいくつかの新しい抗体の発色に対応する場合は、発色時間が長すぎないように監視します。

（4）組織の乾燥：修復液が溢れた後、直ちに液体を補充していない、染色切片が多すぎ、動作が遅すぎ、液滴を忘れ、液滴が流失するなどはすべて組織の乾燥を引き起こす原因である。

（5）スライスが緩衝液または修復液に浸漬する時間が長すぎる（24時間以上）：原因は不明だが、現象は存在する。ある実験室では、前日にスライスを修復まで脱蝋し、翌日に抗体を加えて免疫グループ化染色を行うのが好きで、スライスと修復液を入れた容器を4度冷蔵庫に一晩置くと、結果に明らかな影響はなく、室温、特に暑い夏に置くと、背景着色が現れるため、保管時間が長すぎてはならない。

（6）一抗変質、品質の悪いポリクローナル抗体：抗体の有効期間に注意し、期限切れの抗体は発色しないか背景着色する。新しく買った抗体を用いる場合は、陽性対照と使用済み抗体を比較することが望ましい。

2、スライスエッジの着色

スライスエッジの着色も一般的な現象であり、この現象をエッジ効果と呼ぶ。発生原因：

（1）組織の縁とガラス片の貼り付けがしっかりしておらず、縁組織が緩んで液体に浮遊し、洗浄するたびに組織の下の試薬を洗浄しにくいことによる。解決方法：良質なフィルム（APESまたはポリウレタン）を調製し、できるだけ薄い組織スライスを切り出し、4ミクロンより厚くなく、組織の前期処理は規範化し、壊死の多い組織の選択をできるだけ避けるべきである。

（2）スライスに滴下した試薬は組織を十分にカバーしておらず、エッジの試薬はまず乾きやすく、濃度が中心組織より高く染色が深い。解決方法：試薬は組織を十分に覆い、組織の縁部2 mmを超えなければならない。

3、「陰陽顔」着色

組織の半分が着色し、半分が無着色で、境界がはっきりしているか、あまりはっきりしていない2つの染色結果を形成することを指す。その原因は、試薬が組織の一部だけを覆っているためであり、すべてではない。例えば、試薬を加えた後、試薬の流れを分散させずに一部の組織に集中する。通常は試薬を加えた後、試薬されていない組織があるかどうかをよく見てみなければならない。w全被覆、このような場合は、吸引ヘッドや試薬瓶口ではなく楊枝で試薬を吸引して組織全体を被覆することをお勧めします。また、染色カートリッジは平らではなく、スライスは傾斜しており、開始試薬はすべて組織を覆っていたが、後に試薬は片側に流れ、一部の組織は試薬に覆われていなかった。このような問題に対しては、注意したり考えたりすれば発見しやすく、解決しやすい。

4、かまど板状着色

スライス中の着色区は東一枚西一枚で、かまど状に分布しているが、このような問題の原因は以下の通りである：

（1）錠剤を表装する時、水は排出されず、局部に気泡を形成して組織を突起させ、染色時に試薬が浸透した後、洗浄しにくく、色が濃すぎることによる。解決方法は、漂片箱の中の気泡は取り除くべきで、干し片の熱台は平らに置くことができなくて、45度ぐらいの傾斜度があるべきで、水の流れと蒸発に有利です。

（2）壊死組織巣、組織壊死後の細胞破壊、酵素の放出、蛋白遊離、分解、複雑なペプチド鎖残部（例えばFc段）が一抗または／および二抗と結合して最終着色を引き起こす可能性がある。解決策は染色スライスを選択する際に壊死組織の多いスライスを選択しないことである。

（3）APESフィルムを製作する時、ゴムの濃度が高すぎて、乾燥後ガラスに白色の小点を残して、発色時に白色の小点が着色する。解決方法は標準的な製造方法に従って行い、すなわち5%塩酸アルコール（5 ml塩酸＋95%アルコール95 ml）はガラスを4時間浸漬し、熱湯はガラスを1時間洗浄し、蒸留はガラスを1分洗浄し、アセトンはガラスを5秒浸漬した後に空気乾燥（室温）し、2%APES（2 ml APES＋98 mlアセトン）はガラスを5分浸漬し、ガラスはアセトンを1〜2秒通過し、ガラスは蒸留水を1〜2秒通過し、37は夜乾燥を過ごし、室温で貯蔵する。錠剤製造中にアセトンが徐々に揮発してゲルが濃くなる場合には、適切にアセトンを添加することができる。

5、間質着色

着色部位は主に間質にあり、間質着色の原因は多く、例えば抗体と組織中の蛋白質が蛋白質疎水基の相互作用により非特異的な結合を形成して着色し、一抗前の血清閉鎖を加えることは非特異型の結合を避けるためである。また、血清中の免疫グロブリンはしばしば組織間質に滲出し、抗体と結合しやすく、間質着色、特にlambdaとkappa染色時。甲状腺コロイドが組織間質に流出すると、甲状腺グロブリン染色をすると間質着色も現れる。抗体不純や抗体が汚染されても間質着色が起こり、CD 20抗体不純に遭遇したことがあり、B細胞に感染したほか、間質にも感染した。

6、細胞質着色

プラズマ着色はすべて「不純音'染色の中で最もjは欺瞞的な着色を持ち、着色区は細胞内に限られ、間質は無着色で、実際の免疫反応着色とほぼ同じように見え、区別が難しい。細胞漿にはタンパク質が多く含まれているため、非特異的な染色の多くは間質だけでなく細胞漿にも見られる。この原因による着色は、血清閉鎖によって解決することができる。また、ヘモグロビン（赤血球）、ミオグロビン（筋細胞）、シトクロム（粒細胞、単核細胞）、過酸化水素酵素（肝、腎）などの内因性酵素による着色もあり、これらは過酸化水素で閉鎖することができる。マクロファージは様々な抗原物質やFc断片を飲み込んで細胞質着色が現れ、この着色は避けられないが、形態学的にマクロファージを認識することで重視されることができる。内因性生物s素の着色は最もjが欺瞞性を持って、それは広範に組織細胞の中に存在して、私達の研究結果は：凍結組織の中に内因性生物s素が存在して、ホルマリン固定パラフィン包埋後の生物s素は閉鎖されて、抗原修復を加熱した後に内因性生物s素暴露をもたらして、内因性生物s素暴露の強度は異なる組織で異なって、弱陽性（+）から強陽性（++++）まで、内因性生物s素の組織の中の分布形式、分散も分布もびまん分布もあって、主に顆粒状の形式で細胞漿の中に存在して、内因性生物s素は上皮源源源源性組織、特に腺上皮組織、部分的に非上皮組織も存在し、内因性生物s素は人体組織だけでなくラット組織も存在し、内因性生物s素曝露の強弱は修復液と関係があり、その強度増加はクエン酸、EDTA、EGTA，熱抗原修復暴露の内因性バイオマスは卵白によって閉鎖され、非バイオマス検出システムPolymer二段階法（EliVision、EnVision）はバイオマス干渉を回避することができる。

7、細胞核着色

不適切な組織処理により、細胞核の着色、例えば組織がジメチル/ベンゼン中の浸漬時間が長すぎる（例えば、金曜日から来週の月曜日まで浸漬する）、緩衝液中の浸漬時間が長すぎる、組織が乾燥する、マイクロ波修復液のpH値と修復時間が適切でない、あるいは修復中に修復液が少なすぎて、組織がないなど。解決策は、操作の慣行に厳格に従って作業することです。免疫グループは正常な真の陽性信号を除いて異常な背景着色に遭遇することがよくあり、これらの異常な着色は「雑音」染色と呼ばれる。「雑音」染色は種類が多く、発生の原因も多種多様であり、説明の便宜上、以下にそれを以下のようにまとめた。

1、スライスエッジのシェーディング

スライスエッジの着色も一般的な現象であり、この現象をエッジ効果と呼ぶ。発生した原因：（1）組織の縁とガラス片の貼り付けがしっかりしておらず、縁組織が緩んで液体に浮遊し、洗浄するたびに組織の下の試薬を洗浄しにくいことによる。解決方法：良質なフィルム（APESまたはポリウレタン）を調製し、できるだけ薄い組織スライスを切り出し、4ミクロンより厚くなく、組織の前期処理は規範化し、壊死の多い組織の選択をできるだけ避けるべきである。（2）スライスに滴下した試薬は組織を十分にカバーしておらず、エッジの試薬はまず乾きやすく、濃度が中心組織より高く染色が深い。解決方法：試薬は組織を十分に覆い、組織の縁部2 mmを超えなければならない。

2、間質着色

着色部位は主に間質にあり、間質着色の原因は多く、例えば抗体と組織中の蛋白質が蛋白質疎水基の相互作用により非特異的な結合を形成して着色し、一抗前の血清閉鎖を加えることは非特異型の結合を避けるためである。また、血清中の免疫グロブリンはしばしば組織間質に滲出し、抗体と結合しやすく、間質着色、特にlambdaとkappa染色時に生じる。甲状腺コロイドが組織間質に流出すると、甲状腺グロブリン染色をすると間質着色も現れる。抗体不純や抗体が汚染されても間質着色が起こり、CD 20抗体不純に遭遇したことがあり、B細胞に感染したほか、間質にも感染した。

3、「陰陽顔」着色

組織の半分が着色し、半分が無着色で、境界がはっきりしているか、あまりはっきりしていない2つの染色結果を形成することを指す。その原因は、試薬が組織の一部だけを覆っているためであり、すべてではない。例えば、試薬を加えた後、試薬の流れを分散させずに一部の組織に集中する。通常は試薬を加えた後、試薬されていない組織があるかどうかをよく見てみなければならない。w全被覆、このような場合は、吸引ヘッドや試薬瓶口ではなく楊枝で試薬を吸引して組織全体を被覆することをお勧めします。また、染色カートリッジは平らではなく、スライスは傾斜しており、開始試薬はすべて組織を覆っていたが、後に試薬は片側に流れ、一部の組織は試薬に覆われていなかった。このような問題に対しては、注意したり考えたりすれば発見しやすく、解決しやすい。

4、かまど板状着色

スライス中の着色区は東一枚西一枚で、かまど状に分布しているが、このような問題の原因は次のとおりである：（1）錠剤を表装する時、水は排出されず、局部に気泡を形成して組織を突起させ、染色時に試薬が浸透した後、洗浄しにくく、色が濃すぎることによる。解決方法は、漂片箱の中の気泡は取り除かなければならず、物干し台は平らに置くことができず、45度前後の傾斜があるべきで、水の流れと蒸発に有利である（2）壊死組織巣、組織壊死後の細胞破壊、酵素の放出、蛋白遊離、分解、複雑なペプチド鎖残部（例えばFc段）は一抗または／と二抗結合して最終着色をもたらす可能性がある。解決策は染色スライスを選択する際に壊死組織の多いスライスを選択しないことである。（3）APESフィルムを製作する時、ゴムの濃度が高すぎて、乾燥した後にガラスに白色の小点を残して、発色時に白色の小点が着色する。解決方法は標準的な製造方法に従って行い、すなわち5%塩酸アルコール（5 ml塩酸＋95%アルコール95 ml）はガラスを4時間浸漬し、熱湯はガラスを1時間洗浄し、蒸留はガラスを1分洗浄し、アセトンはガラスを5秒浸漬した後に空気乾燥（室温）し、2%APES（2 ml APES＋98 mlアセトン）はガラスを5分浸漬し、ガラスはアセトンを1〜2秒通過し、ガラスは蒸留水を1〜2秒通過し、37は夜乾燥を過ごし、室温で貯蔵する。錠剤製造中にアセトンが徐々に揮発してゲルが濃くなる場合には、適切にアセトンを添加することができる。

5、細胞質着色

細胞漿着色はすべての「雑音」染色の中で最もjが欺瞞的な着色であり、着色区は細胞内に限られ、間質は無着色であり、実際の免疫反応着色とほぼ同じように見え、区別が難しい。細胞漿にはタンパク質が多く含まれているため、非特異的な染色の多くは間質だけでなく細胞漿にも見られる。この原因による着色は、血清閉鎖によって解決することができる。また、内因性酵素による着色、例えばヘモグロビン（赤血球）、ミオシン（筋細胞）、シトクロム（顆粒細胞、単核細胞）、過酸化水素酵素（肝、腎）、これらは過酸化水素で閉鎖することができる。マクロファージは様々な抗原物質やFc断片を飲み込んで細胞質着色が現れ、この着色は避けられないが、形態学的にマクロファージを認識することで重視されることができる。内因性生物s素の着色は最もjが欺瞞性を持って、それは広範に組織細胞の中に存在して、私達の研究結果は：凍結組織の中に内因性生物s素が存在して、ホルマリン固定パラフィン包埋後の生物s素は閉鎖されて、抗原修復を加熱した後に内因性生物s素暴露をもたらして、内因性生物s素暴露の強度は異なる組織で異なって、弱陽性（+）から強陽性（++++）まで、内因性生物s素の組織の中の分布形式、分散も分布もびまん分布もあって、主に顆粒状の形式で細胞漿の中に存在して、内因性生物s素は上皮源源源源性組織、特に腺上皮組織、部分的に非上皮組織も存在し、内因性生物s素は人体組織だけでなくラット組織も存在し、内因性生物s素曝露の強弱は修復液と関係があり、その強度増加はクエン酸、EDTA、EGTA，熱抗原修復暴露の内因性バイオマスは卵白によって閉鎖され、非バイオマス検出システムPolymer二段階法（EliVision、EnVision）はバイオマス干渉を回避することができる。

6、細胞核着色

不適切な組織処理により、細胞核の着色、例えば組織がジメチル/ベンゼン中の浸漬時間が長すぎる（例えば、金曜日から来週の月曜日まで浸漬する）、緩衝液中の浸漬時間が長すぎる、組織が乾燥する、マイクロ波修復液のpH値と修復時間が適切でない、あるいは修復中に修復液が少なすぎて、組織がないなど。解決策は操作慣行に厳格に従って作業することである。