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一般的には酵素結合免疫吸着試験検出されたサンプルには、血清、血漿、尿、細胞培養上清、組織均質スラリーなど、複数のタイプがあり、異なるタイプの検出サンプルの前期の処理方法は異なる。正しい処理サンプルは保証酵素結合免疫吸着試験検出の正確性と正確性の*ステップについて、異なるタイプのサンプルの処理方法を簡単に紹介します。
1、 血清
血清はzuiによく使われる酵素結合免疫吸着試験検出されたサンプルの種類は、処理も比較的簡単です。
熱原、内毒素のない試験管または遠心管で血液サンプルを採取し、試験管または遠心管を室温に置く2時間または4℃で一晩過ごし、血清を析出させた。(試験管または遠心管を斜めに置き、液面断面を増大させ、血清をより大きく析出させることができる。)4℃1000×グラム遠心分離20分ああ、上清をよく集めてください。血清を複数に分割することを提案し、-20℃または-80℃で保存し、繰り返しの凍結融解を避ける。
赤血球が分解すると過酸化酵素活性を持つ物質が放出されるため、採血中に溶血を避けるべきである。HRPタグ付き酵素結合免疫吸着試験検出には非特異的な発色があり、検出の不正確さをもたらします。菌体内に内因性のHRP結果として検出された偽陽性を引き起こす。
2、 血漿
抗凝固剤を含む採血管または遠心管を用いて血液標本を採集し、標本採集後30分内(うち)4℃ 1000×グラム遠心分離15分、清を取ると血漿になります。上清を複数部に分けて、-20℃または-80℃で保存し、繰り返しの凍結融解を避ける。溶血または高脂血の標本の使用を避ける。
一般的に使用される抗凝固剤はエチレンジアミン四酢酸、ヘパリンナトリウムとクエン酸ナトリウムなど、測定時にはキットの説明書をよく読んで、キットが抗凝固剤に特別な要求があるかどうかを検査しなければならない。
3、 細胞培養上清
細胞培養上清を遠心管まで採取し、1000×グラム遠心分離20分細胞の破片や不純物を除去し、上澄みを取る、-20℃または-80℃で保存し、繰り返しの凍結融解を避ける。
4、 さいぼうぶんかいえき
1) 培養プレート内の培地を吸引し、トリプシンで細胞を消化し、適量の培地を加えて培養プレートから細胞を吹き落とす。懸濁細胞は省略することができる。
2) 細胞懸濁液を集め、1000×グラム遠心分離10分、培地を捨て、予冷した公共放送サービスすすぎ洗い3回。
3) 適量の予冷を加える公共放送サービスまたは細胞溶解液(使用直前にプロテアーゼ阻害剤を添加)再懸濁細胞。通常(つうじょう)6孔板の1つの孔の細胞量は必要です150~250μL PBS重懸。
4) サンプルを入れる-20℃または-80℃で、サンプルを冷凍させ、更に室温でサンプルを解凍し、何度も凍結融解を繰り返し、細胞を十分に分解させた。試料を超音波破砕して、分解の目的を達成することもできる。
5) 4℃10000×g遠心分離10分細胞の破片を除去し、清め、-20℃または-80℃で保存し、繰り返しの凍結融解を避ける。
5、組織均質スラリー
1) 組織サンプル用PBS(0.01M、 PH 7.4)洗い流し、組織表面に残った血液や不純物を洗い流す。
2) 組織ブロックを秤量し、記録後に切断し、破片はできるだけ小さくし、均質にしてより十分にすることができるようにしなければならない
3) 予冷した組織を一定の割合で加える公共放送サービス(使用前にプロテアーゼ阻害剤を添加)ホモジナイズし、ホモジナイズした時に氷上または氷浴中に置く。(通常、組織重量:公共放送サービス体積=1:9の均質なスケール、例えば初代の組織サンプルへの対応9mLの公共放送サービス、具体的な体積は実験の必要に応じて適切に調整することができ、検査後にサンプル濃度を計算する際に相応の希釈倍数を掛けるべきである)
4) スラリーを遠心管に吸収する、4℃5000×g遠心分離5~10分、上清を取って、-20℃または-80℃で保存し、繰り返しの凍結融解を避ける。
6、 尿、唾液などの他の液体生物サンプル
1000×g遠心分離20分を選択し、クリアランスを取得すれば検出できます。
つまり、酵素結合免疫吸着試験可溶性蛋白質の含有量しか測定できないので、すべてのサンプルが透明な液体であることを保証し、沈殿物や懸濁物は遠心分離して除去しなければならない。
検査の正確性を保証するために、-20℃または-80℃のサンプルは1~6ヶ月以内に検査する、4℃で保存したサンプルは1週間以内に検査を行う。
また、サンプルが含まれていないことを保証する必要がありますNaN3あ、だってNaN3抑制されるHRPの活性を得て、偽陰性の結果をもたらす。