お客様のご来店を歓迎します!

会員資格

助け

上海博耀生物科学技術有限公司(上海博耀商貿有限公司)
カスタム製造元

主な製品:

イブザン>ニュース

上海博耀生物科学技術有限公司(上海博耀商貿有限公司)

  • メール

    1914109725@qq.com

  • 電話番号

  • アドレス

    上海市閔行区景連路439号4 A 410室

今すぐ連絡してください
ELISA技術における抗原と抗体の反応
日付:2013-09-12読む:4

1.2.1抗体の構造

抗体は抗原に特異的に結合する免疫グロブリンである(免疫グロブリン、Ig)免疫グロブリン5種類に分類する、すなわち免疫グロブリンG免疫グロブリンA免疫グロブリンIgD免疫グロブリンE。免疫測定に関連する免疫グロブリン主に免疫グロブリンG免疫グロブリン免疫グロブリン2つの軽鎖(L)と2つの重鎖(H)のモノマー組成である。免疫グロブリンの軽鎖は同じで、ありますκキャパ)とλラムダ.)の2つのタイプがあります。5種類免疫グロブリンの重鎖構造が異なり、これによりそれらの抗原性も異なることが決定された。免疫グロブリンG免疫グロブリンの重鎖をそれぞれγガンマ)チェーンとμ)チェーン。

重鎖と軽鎖のN末端のアミノ酸配列順序は各種抗体によって異なり、可変領域と呼ばれ、それぞれVHVLに表示されます。両者は抗体の抗原結合部位を構成し、対応する抗原決定クラスタとのみ一致する配、特異的結合が発生し、抗体特異的結合抗原の構造基礎である。

免疫グロブリンGパパインプロテアーゼによって3つのセグメントに分解することができ、そのうち2つの同じセグメントは抗原結合フラグメント(ウェハ工場)。各ウェハ工場結合抗原の能力を保存していますが、1つだけ抗原結合部位は1価であり、抗原と結合した後に凝集や沈殿は現れない。別の区間称サッカークラブセグメント、抗体活性はないが、免疫グロブリンG*の抗原性。

免疫グロブリンGペプシンによって2つの断片に分解され、1つはウェハ工場バイポーラFab2、2つの同じ抗原と結合することができます、別のフラグメントの類似性サッカークラブ、その後分解される小分子ポリペプチドを形成し、生物活性がない。

免疫グロブリンは5つの単量体からなる5量体であり、 10個の重鎖と10個の軽鎖、有10個の抗原結合価は、空間位置の影響により、5個の抗原結合価にしか現れなかった。免疫グロブリン分子量は約900000免疫グロブリンG分子量は約150000

生体が微生物に感染すると、まず発生する免疫グロブリン抗体を作り免疫グロブリンG抗体。しばらく経って、免疫グロブリン抗体量は徐々に減少して消え、免疫グロブリンG抗体は長期的に存在することができ、病気*後数年持続する長い間。

免疫グロブリン抗体は一般的に保護抗体であり免疫性を有する。したがって免疫グロブリン抗体の測定は、甲型肝炎などのいくつかの感染症に対して高い臨床診断価値がある。右図はA型肝炎患者の血清中免疫グロブリンG抗体と免疫グロブリン抗体が出現する時間とレベル。

1.3抗原抗体反応

1.3.1可逆性

抗原と抗体が結合して抗原抗体複合体を形成する過程は動的平衡であり、その反応式は:

Ag+AbAg·Ab

抗体の親和性(しんわりょく)は抗原抗体間の固有結合力であり、平衡定数K次のように表示されます。

K=[Ag·Ab][Ag][Ab]

Ag·Abの解離度とK値が関連付けられています。高親和性抗体の抗原結合点と抗原の決定クラスタは空間構造上で非常に適しており、両者の結合は強固で、解離しにくい。解離後の抗原または抗体はいずれも元の構造と活性を維持することができるので、アフィニティークロマトグラフィーを用いて抗原または抗体を精製することができる。抗血清において、特異的な免疫グロブリンG抗体は総免疫グロブリンGの極小部分です。アフィニティークロマトグラフィーで抽出された特異的抗体は、アフィニティークロマトグラフィー純抗体と呼ばれ、免疫測定に応用するとより良い効果が得られる。

1.3.2zui適合率

一定量の抗体に増分量の抗原を加えた抗体形成複合体(沈殿)の量を示すグラフ1-4。曲線のピーク部分は抗原抗体比率zuiの適切な範囲であり、等価帯(とうかちいき)。等価帯の前後にはそれぞれ抗体過剰帯と抗原過剰帯がある。抗原や抗体が極端に過剰であれば沈殿物形成はなく、免疫測定においてバンド現象(ちいきげんしょう)。抗体過剰を前帯(フロントバンド)、抗原の過剰量を後帯域(バックバンド)。免疫学的方法で抗ウイルスを測定しています元の場合、反応系に十分な抗体量を持たせなければならない。そうしないと、測定された量は実際の含有量より小さくなり、偽陰性になることもある。

1.3.3特異性

抗原抗体の結合は、実質的に抗原の抗原決定クラスタと抗体の抗原結合部位との間でのみ発生する。両者は化学構造と空間構造に相補的な関係を呈するため、抗原抗体反応には高度な特異性がある。例えばB型肝炎ウイルス中の表面抗原(B型肝炎表面抗原)、e抗原(HBeAg)とコア抗体(HBcAg)、同じウイルスに由来するが、それに対応する抗体にのみ結合し、他の2つの抗体とは結合しない反応。抗原抗体反応のこのような特異性により、免疫アッセイは非常に複雑なタンパク質化合物(例えば血清)の中で特定の物質を測定することができ、まず検体を分離する必要はない

しかし、この特異性もそうではありません。2つの化合物が部分的に同じ構造を持っている場合、抗原抗体反応において交差反応が生じる可能性がある。例:絨毛膜ゴナドトロピン(ヒト絨毛膜ゴナドトロピン)と黄体生成ホルモン(キサントフィル)はすべてαβ2つのサブユニットからなり、その構造の違いはβサブユニット、両方のα亜単位は同類である。用いるヒト絨毛膜ゴナドトロピン免疫動物から得られる抗血清には抗α-hCG和抗β-絨毛膜ゴナドトロピン2種類の抗体、抗α-hCG抗体はキサントフィル
α酵素位が交差反応を起こす。臨床検査では、例えば抗ヒト絨毛膜ゴナドトロピン妊娠診断試薬としての抗血清検定尿中ヒト絨毛膜ゴナドトロピンを選択して、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン濃度の高い試験、そうでなければ女性の生理的排泄尿中の微量キサントフィルこれと交差反応します。そのため、早産診断(感度は50mIu/mlhCG)の実際に必要アプリケーションペアのみヒト絨毛膜ゴナドトロピン特異的な抵抗β-絨毛膜ゴナドトロピンを使用して、他のホルモンとの交差反応の発生を回避します。

1.3.4かんど

血清中のある物質の含有量を測定する際の化学比色法の感度はmg/mlレベル、酵素反応測定法の感度は約5~10μg/ml、免疫測定におけるゲル拡散法と濁度法の感度は酵素反応法と類似している。タグ付きフリー疫学測定の感度は数千倍に向上し、ng/ml水平方向例えば、放射免疫測定法や酵素免疫測定法による測定B型肝炎表面抗原、その感度は0.1ナノグラム/ミリリットル

1.4臨床検査における免疫測定の応用

小分子の半抗原を含む様々な抗原成分のため、特異的な抗血清またはモノクローナル抗体を製造することができ、この抗体を試薬として利用することで標本中の対応する抗原を検出することができるそのため、免疫測定の応用範囲は極めて広く、臨床検査で測定に用いることができる:

1)体液中の各種タンパク質には、メチル胎児性タンパク質などの極めて少ない含有量のタンパク質が含まれる。

2)低分子量のステロイドホルモンなどを含むホルモン。

3)抗生物質と薬。

4)病原体抗原、B型肝炎表面抗原HBeAgなどがあります。

5)また、精製された抗原検出検体中の抗体、例えば抗-HBなどがあります。

5・マーカーの免疫測定

上述のように、免疫測定は非常に敏感な測定方法であり、抗原抗体反応後に形成された沈殿または濁度を直接測定し、感度が5~10μg/mlしかし、臨床検査では、検体中の測定対象物の含有量がこのレベルをはるかに下回っているため、感度を高める方法を探しています。マーカーの免疫測定は検出試薬中の抗原または抗体を微量測定可能な物質で標識し、標識物質を測定することで感度を高める。放射性免疫測定及び酵素免疫測定において、マーカーはそれぞれ放射性核種と酵素のために、zui後に放射性と酵素活性を測定して被検物の量を計算し、感度は直接沈殿物を測定するより数百から数千倍高めることができる。標識免疫測定において、一般的には、測定対象物*との反応を保証するために過剰な標識試薬が添加される。抗体(抗体)抗原検出()を例に挙げ、反応式は以下の通り:

Ag+Ab AgAb+Ab

反応生成物にはけつごう抗体と遊離と抗体 、両者を分離せずに標識物を測定すると、測定結果は両者の和になる。したがって、遊離マーカーと結合マーカーの分離はマーカー免疫測定における重要なステップである。採取可能複数の手段を用いて、固相担体はその1つである。抗原または抗体を固相担体に被覆した後、標識抗原または抗体と直接反応させ、結合した標識物を担持体に固定する体上にあり、遊離した標識物は溶液中に残っている。これにより、洗浄により遊離する抗体除去し、結合マーカーの測定は固相上で行うことができる。

6・酵素免疫測定

酵素免疫測定(酵素免疫測定)は均一相(ホモダイン)と不均一相(ヘテロ)の2種類があります。在中均質相環境影響評価中可遊離および結合されたマーカーの分離を行うことなくマーカーを直接測定することができる。例えばある条件下で、抗原抗体反応後に形成される酵素標識抗原抗体複合体中の酵素が失われるそれは基質に作用する活力であり、したがって測定された酵素活力は遊離した酵素マーカーを直接反映する。きんいつそう環境影響評価臨床検査での応用は少ない。ふきんいつそう環境影響評価まず遊離の和を行う必要がある結合したマーカーの分離。前述したように、固相担体は分離手段として使用することができる。この固相酵素免疫測定方法は1971年にzuiが初めて設立された時に酵素結合免疫吸着剤と呼ばれています測定(酵素結合免疫吸着試験)、略称酵素結合免疫吸着試験、国内で酵素結合免疫吸着試験と訳されるものがあり、意味は確かではないが、すでに慣用されている。