本キットは科学研究にのみ使用でき、医学診断には使用できません

植物（植物）景天ヘプタノ糖-1,7-ジホスファターゼ（SBPase の）

MELISA検出キット

取扱説明書

けんしゅつげんり

キットは二重kàng体一段階サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）を用いた。あらかじめ景天ヘプタノ糖−1,7−ジホスファターゼ（SBPase）kタング体を被覆した被覆微小孔に、標本、標準品、HRP標識の検出kタング体を順に加え、インキュベートしてchè底洗浄した。基質TMBを用いて発色し、TMBはペルオキシダーゼの触媒下で青色に変換し、酸の作用下で最終的な黄色に変換する。色の濃淡は試料中の景天ヘプタノ糖−1，7−ジホスファターゼ（SBPase）と正の相関を示した。酵素スケールを用いて450 nm波長で吸光度（OD値）を測定し、サンプル活性を計算した。

サンプル収集、処理及び保存方法

1.血清：熱源と内毒素を含まない試験管を使用し、操作中にいかなる細胞刺激を回避し、血液を収集した後、3000回転遠心10分で血清と赤血球を迅速に注意深く分離した。

2.血漿：EDTA、クエン酸塩またはヘパリン抗凝固。3000回転遠心30分で上清を取る。

3.細胞上清：3000回転遠心10分間で粒子とポリマーを除去する。

4.組織均質：組織を適量の生理食塩水に加えて砕く。3000回転遠心10分で上清を取る。

5.保存：サンプル収集後に適時に検査しない場合は、一回の使用量で分注して、-20℃に凍結保存して、繰り返しの凍結融解を避けて、室温で解凍して、サンプルが均一に凍結を充分解することを確保してください。

持参品

1.酵素スケール（450 nm）

2.高精度サンプラ及びガンヘッド：0.5-10 uL、2-20 uL、20-200 uL、200-1000 uL

3.37℃恒温タンク

操作上の考慮事項

1.キットを2〜8℃に保存し、前室温平衡を用いて20分間保存した。冷蔵庫から取り出した濃縮洗浄液は結晶化するのが正常で、水浴加熱により結晶wλnが完全に溶解してから使用する。

2.実験中に使用しなかったスラットは直ちに自己封袋に戻し、密封（低温乾燥）して保存しなければならない。

3.濃度が0のS 0号標準品は陰性対照または空白と見なす、説明書に従って操作すると、サンプルは5倍希釈され、最終的な結果に5を乗じてサンプルの実際の濃度になります。

4.明細書に記載された時間、加液量及び順序に厳格に従って温育操作を行う。

5.すべての液体成分を使用する前に十分に均一に振る。

キット組成

注：標準品（S 0-S 5）濃度は順に：0、6.25、12.5、25、50、100 U/mL

試薬の準備

20×洗浄緩衝液の希釈：蒸留水を1：20で希釈する、すなわち1部の20×洗浄緩衝液に19部の蒸留水を加える。

プレート洗浄方法

1.手動洗濯板：穴の中の液体を振り切って、穴ごとに洗濯液をいっぱい入れて、1 min静置した後に穴の中の液体を振り切って、吸水紙の上でたたいて乾かして、このように5回洗濯板を洗います。

2.自動洗濯機：1穴あたり350μLの洗浄液を注入し、1 min浸漬し、5回洗浄する。

操作手順

1.室温平衡20 min後のアルミニウム箔袋から必要なスラットを取り出し、残りのスラットを自己封止袋で密封して4℃に戻した。

2.標準品孔とサンプル孔を設置し、標準品孔にそれぞれ異なる濃度の標準品50μLを添加する、

3.試料孔にはまず試料10μLを添加し、さらに試料希釈液40μLを添加する。空白の穴は入れない。

4.空洞を除いて、標準品孔とサンプル孔にそれぞれの孔にワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識の検出kàng体100μLを添加し、封板膜で反応孔を封止し、37℃水浴鍋または恒温箱で60 minインキュベートした。

5.液体を捨てて、吸水紙の上でたたいて乾かして、穴ごとに洗浄液をいっぱい入れて、1 min静置して、洗浄液を振り切って、吸水紙の上でたたいて乾かして、このように洗濯板を5回繰り返します（洗濯機で洗濯板を洗うこともできます）。

6.1ウェル当たり基質A、Bを各50μL添加し、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

7.終端液を1ウェル当たり50μL、15 min添加し、450 nm波長で各ウェルのOD値を測定した。

結果の判断

標準曲線の描画：Excelワークシートにおいて、標準品濃度を横座標とし、OD値に対応して縦座標とし、標準品線形回帰曲線を描画し、曲線方程式に基づいて各サンプル濃度値を計算する。

キット性能

1.正確性：標準品の線形回帰と予想濃度相関係数R値、0.9900以上。

2.感度：zuhuan低検出濃度は0.1 U/mL未満である。

3.特異性：他の可溶性構造類似体と交差反応しない。

4.重複性：板内、板間変異係数はいずれも15%未満である。

5.貯蔵：2-8℃、遮光防湿保存。

6.有効期間：6ヶ月

免責事項

1.キットは研究用のみであり、臨床実験や人体実験に使用してはならない。そうしないと発生したすべての結果は、実験者が負担し、当社は一切責任を負わない。

2.説明書に厳格に従って操作し、実験者は説明書の操作に違反し、結果は実験者が負担する。