製品名 ：ヒト末梢血リンパ球分離液

製品仕様 ：200ミリリットル

保管条件：:RT，光をさける

有効期間：12ヶ月

製品概要：本製品はヒト末梢血リンパ球を分離するための無菌、低エンドトキシンレベルの密度勾配分離液である。その分離原理は、血球の密度の違い（赤血球と粒細胞の密度は1.090 g/ml左右リンパ球と単球の密度は1.075 ~ 1.090 g/ml;血小板は1.030 ~ 1.035 g/ml）、遠心分離により一定の密度の細胞を相応の密度勾配で分布させ、それによりリンパ細胞をヒト末梢血または臍帯血から分離した。

製品指標：密度1.077±0.001g/mL浸透圧290〜350 mOsm/kg H2O無菌0.1μ米ろ過膜ろ過

保存条件：本製品は光に敏感で、室温で光を避けて貯蔵すべきで、賞味期限1 年です。無菌開封後、室温に保存した。

操作手順：1. 新鮮な抗凝固全血を採取する（エチレンジアミン四酢酸、クエン酸ナトリウム又はヘパリン抗凝固のいずれでもよい）又はフィブリン除去血液を用いて、等体積の全血及び組織希釈液又は公共放送サービス全血を希釈する。2. 遠心管に適量の分離液を添加する（希釈後の血液体積が3mLに参加する3mL分離液以上3mL、等体積分離液を添加する。しかし、両者の総体積は遠心管の3分の2を超えてはならず、そうしないと分離効果に影響を与える）、希釈後の血液を分離液液面の上に平らに敷き、両液面界面を明確に保つことに注意する。（バロンドールストローを用いて血液を吸収し、その後、血液を分離液に慎重に平らにすることができ、両者の密度の違いにより、明らかな層状界面が形成される。サンプルが多く添加時間が長い場合、遠心分離前に赤血球の塊沈下が正常な現象が現れる。）

3. 室温、水平回転子500～1000 g、遠心分離20～30分（血液の体積が大きいほど必要な遠心力が大きくなり、遠心時間が長くなればなるほど、最適な分離条件は模索する必要があり、遠心回転速度は最大で超えない1200グラム）。4. 遠心分離後に明らかな階層が現れる：最上層は希釈した血漿層で、中間は透明な分離液層で、血漿と分離液間の白膜層はリンパ球層であり、遠心管底部は赤血球と粒細胞である。5. 注意深く白膜層細胞を吸収して15mLきれいな遠心管の中で、10mL PBSあるいは細胞洗浄液が白膜層細胞を洗浄する。250グラム、遠心分離10分。6. 上清を捨てて、5mLの公共放送サービスあるいは細胞洗浄液の再懸濁細胞、250グラム、遠心分離10分。7. 手順を繰り返す68. 上清を捨て、細胞を再懸濁して予備する。

分離純度：ヒトリンパ球分離液を用いたリンパ球の分離純度は、90%。

注意事項：A.開封前に逆さまに混合し、本分離液は無菌製品であり、分離液の保存時間を延長するために、無菌条件下で開封し、微生物汚染を回避してください。B分離液を使用する場合は常に室温（18℃~25℃）、室内温度が低い場合、分離液を予熱することができる。4℃または温度が低い条件下で遠心分離すると、白膜層中の赤血球汚染が悪化する可能性がある。C血液サンプルは新鮮抗凝固（採血2時間以内）、リンパ球の活性を維持するために、冷凍と冷蔵を避けるべきである。D血液を希釈したり細胞を洗浄したりして、含有物を使用してはならないカルシウム、マグネシウムイオンの緩衝液と培養液は、その成分が血液細胞の凝集を招き、細胞の収率と純度を大幅に低下させる。E一部のプラスチック製品（ポリスチレンなど）は、静電気作用を伴うため、細胞が壁に引っかかり、分離効果に影響を与える可能性がある。F血液サンプルの粘度や温度差は分離効果に影響する可能性があり、遠心回転数と遠心時間を調節し、最適な分離条件を模索することができる。Gリンパ球層及び分離液層を吸いすぎると、分離液境界部の粒細胞が吸い出され、混在する粒細胞の数が増加する。多量の血漿層を吸収すると、リンパ球中の血漿蛋白質及び血小板汚染を引き起こす可能性がある。Hさらに分離した細胞を培養する場合は、血液の収集と分離の過程で無菌操作に注意し、微生物汚染を避ける。一、異なる動物血液の異なる比重分離液中の細胞離散係数及び細胞帯電が異なり、ユーザーは分離液を制定する際に必要な分離液の比重、動物種属及び被分離細胞の名称を提供すべきである。