マウスミオグロビン（MYO/MB）キットELISA操作フロー：

（1）、測定対象サンプル孔に各孔に測定対象サンプル100μ1を添加し、各サンプルに3個の平行孔を設置する、2つの陰性対照孔を設け、各孔に未処理を加える

グループの細胞分解液100μ1、別の空白対照孔を設け、純細胞分解液100μ1を添加した。

（2）酵素プレートを4℃に置き、一晩被覆した。

（3）洗濯板：乾燥孔内の反応液を吸引し、洗濯液で一度洗い（洗濯液を板孔にいっぱい入れた後、すぐに振り切る）、その後、洗濯液を板にいっぱい入れる

穴、1〜2分間浸漬し、間欠的に揺動する。穴の中の液体を振り切った後、吸水紙の上でたたいて乾かします。洗濯を3 ~ 4回繰り返す。

（4）陰性対照ウェル1ウェルにPBS 50μ1を添加し、サンプルウェルおよび空白ウェル1ウェルに1：500希釈抗ヒトAIF抗体フリー作動液50μ1を添加する。

（5）酵素プレートを37℃培養箱の湿式箱に入れ、60分間インキュベートした。

（6）洗濯板、同（4）。

（7）1ウェル当たり1：5000希釈HRP−標識ヤギ抗無抗体作動液を100μ1添加する。

（8）酵素プレートを37℃培養箱の湿式箱に入れ、60分間インキュベートした。

（9）洗濯板、同（4）。

（10）TMB発色液を1孔に100μ1添加し、10 s軽く混合し、37℃で15〜20 min暗所反応させた。

（11）1ウェル当たり100μ12 mo 1/LH 2 S 04を加えて反応を停止する。

（12）容器上での吸収を減らすために、450 nmの吸収値V 1と630 nmの吸収値V 2をそれぞれ測定し、最終的に測定された0 D値は両者の差（V 1−v 2）である

のスクラッチや指印などによる光干渉。

（13）データ処理：標本（S）と陰性対照（N）のOD値を得た後、S／N値を計算する。S/N>2.1は陽性判定基準である。